Найден эффективный метод получения рекомбинантного белка SpCas9

Учеными из Центра высокоточного редактирования и генетических технологий для биомедицины представлен эффективный и простой метод получения рекомбинантного белка Streptococcus pyogenes Cas9 (SpCas9).

Система CRISPR/Cas9 является революционным инструментом для точного редактирования генома в различных типах клеток. Наиболее перспективный для терапевтического применения и при этом высоко эффективный при редактировании генома методом доставки Cas9 в клетки – доставка рибонуклеопротеиновых частиц (РНП). Однако, для получения РНП требуется большое количество высокоочищенного белка Cas9.

Команда ученых разработала эффективный и простой метод получения рекомбинантного белка SpCas9. Для повышения эффективности сворачивания белка при экспрессии в бактериальных клетках, к последовательности, кодирующей SpCas9, была добавлена последовательность Small Ubiquitin Like Modifier (SUMO). В результате авторам удалось получить около 4 мг высокоочищенного препарата SpCas9 из литра бактериальной культуры. При оценке эффективности геномного редактирования была подтверждена высокая активность полученного РНП как при негомологичном соединении концов, так и при гомологичной рекомбинации.

Центр высокоточного редактирования и генетических технологий для биомедицины является частью проекта по созданию и развитию Центров геномных исследований мирового уровня в соответствии с Постановлением Правительства Российской Федерации от 30 апреля 2019 г. № 538 «О мерах государственной поддержки создания и развития научных центров мирового уровня». Центр был создан в рамках Федеральной научно-технической программы развития генетических технологий национального проекта «Наука и университеты». В Центре проводят геномные исследования и разработку генетических технологий на мировом уровне.

Также над исследованием работали специалисты из Института Молекулярной Биологии им. В.А. Энгельгардта РАН; Биологического факультета Российского национального исследовательского медицинского университета имени Н.И. Пирогова; Института высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН.

Источник: ФГБУН «Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта» РАН