Специалистами ФГБУ «ВНИИЗЖ» разработана тест-система для выявления генома вируса африканской чумы свиней
Ввиду отсутствия в настоящее время в широком использовании безопасных и эффективных вакцин против африканской чумы свиней (АЧС) важную роль в профилактике распространения инфекции по-прежнему играет своевременное и качественное проведение диагностических исследований образцов биологического материала.
Сотрудниками референтной лаборатории по АЧС ФГБУ «ВНИИЗЖ» в рамках научно-исследовательской работы разработана «Тест-система для выявления генома вируса АЧС методом гнездовой полимеразной цепной реакции с электрофоретической детекцией».
Гнездовой вариант отличается от других вариаций ПЦР наибольшей чувствительностью и специфичностью, поскольку использование двух пар праймеров («внутренних» и «внешних») позволяет избежать амплификации неспецифических фрагментов. При постановке реакций пары праймеров для гнездовой ПЦР подбираются таким образом, что места отжига олигонуклеотидов для второго этапа ПЦР находятся внутри фрагмента генома, фланкированного праймерами первой ПЦР.
Принцип представленной тест-системы заключается в проведении двух последовательных полимеразных цепных реакций (ПЦР) с использованием праймеров, фланкирующих фрагменты генома вируса разной длины. Отечественная разработка позволяет на первом этапе нарабатывать фрагмент ДНК гена B646L, кодирующего капсидный белок vp72 вируса АЧС длиной 600 п.н., а на втором этапе использует продукт первой реакции в качестве ДНК матрицы, для амплификации фрагмента гена B646L в размере 300 п.н.
Использование тест-системы позволяет выявлять ген-мишень в «сложных образцах» с низким содержанием генома вируса АЧС, например, в костных останках от павших животных, термически обработанной продукции свиноводства, контаминированных объектах окружающей среды. Разработанная тест-система также может быть использована в качестве дополнительного инструмента при получении сомнительных результатов другими методами исследований.